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ctab溶解方法?

(1) 2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。

(2)取少量实验材料(约300mg)置于研钵中,用液氮磨至粉状;

(3) 加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液,轻轻搅动;

(4) 将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌离心管中,磨碎液的高度约占管的三分之二;

(5)置于65℃的水浴槽或恒温箱中,每隔10 min轻轻摇动,30~60min后取出;

(6)冷却2 min后,加入氯仿-异戊醇(24:1)至满管,剧烈振荡2~3 min(若提取的是总基因组,则不能剧烈震荡。),使两者混合均匀;

(7)放入离心机中10 000 rpm离心10 min,与此同时,将600 ul的异丙醇加入另一新的灭菌离心管中;

(8) 10 000 rpm离心1 min后,移液器轻轻地吸取上清夜,转入含有异丙醇的离心管内,将离心管慢慢上下摇动30 sec,使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物;

(9)10000 rpm离心1 min后,立即倒掉液体,注意勿将白色DNA沉淀倒出,将离心管倒立于铺开的纸巾上;

(10)60 sec后,直立离心管,加入720ul的75%乙醇及80 ul 5 M的醋酸钠,轻轻转动,用手指弹管尖,使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中;

(11)放置30 min,使DNA块状物的不纯物溶解;

(12)10000 rpm离心1 min后,倒掉液体,再加入800 ul 75%的乙醇,将DNA再洗 30 min;

(13)10000 rpm离心30 sec后,立即倒掉液体,将离心管倒立于铺开的纸巾上;数分钟后,直立离心管,干燥DNA(自然风干或用风筒吹干);

(14)加入50 ul 0.5 × TE(含RNase)缓冲液,使DNA溶解,置于37℃恒温箱约15 h,使RNA消解;

匿名回答于2021-09-21 06:36:12


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