蛋白质电泳基本原理介绍以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持物的一种电泳方法，人为控制聚丙烯酰胺凝胶聚合成孔径的大小，通过类似分子筛的作用把蛋白质分开。它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)。非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。而SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。蛋白质的迁移率仅取决于蛋白质的分子质量的大小。与已知分子质量的标准品比较，可以测定蛋白质的分子质量。
2.
聚丙烯酰胺凝胶电泳系统介绍
聚丙烯氨酰基质电泳的早期形式，即在自由溶液中进行的移动界面电泳已成为历史，代之以采用支持介质的区带电泳现在被广泛的使用。采用支持介质的目的是防止电泳过程中的对流和扩散，以使被分离的成分得到最大分辨率的分离。支持介质应具备以下特征：化学惰性，不干扰大分子的电泳过程，化学稳定性好，均匀，重复性好等。固体支持介质可分为两类：一类是如纸、醋酸纤维素膜、硅胶、纤维素等。另一类是如淀粉、琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶等。目前，第一类支持介质已逐渐被第二类支持介质所替代。其中，聚丙烯酰胺凝胶，由于它的高分辨率，已成为目前生化实验室最常用的支持介质。聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel，PAG）是由单体丙烯酰胺（acrylamide，简称Acr）和交联剂N,N'-甲叉双丙烯酰胺（N,N'-methylenebisacrylamide）在催化剂和加速剂作用下聚合交联而成的三维网状结构的凝胶。一般用于蛋白质电泳的凝胶选用29:1的丙烯酰胺与N,N'-甲叉双丙烯酰胺的混合物，以过硫酸铵作为引发剂进行聚合。
连续电泳和不连续电泳连续电泳是指电泳
匿名回答于2023-09-24 00:24:24
蛋白质电泳的基本方法包括：
1. 准备样品：将待检测的蛋白质混合物进行处理，如加入还原剂、缓冲剂等，使其适合进行电泳分离。
2. 准备凝胶：将聚丙烯酰胺或琼脂糖等材料制成凝胶，根据需要选择不同孔径大小的凝胶进行分离。
3. 装载样品：将准备好的样品通过吸管或微量移液器等装载到凝胶中。
4. 电泳分离：将凝胶置于电泳槽中，加入电解质缓冲液，通电进行分离。根据需要可以采用不同电泳方式，如垂直电泳、水平电泳、等电聚焦等。
5. 染色检测：将分离后的蛋白质染色，如用银染法、考马斯亮蓝染法等，通过比较分析不同样品中蛋白质条带的数量、大小和形状等特征，可以确定样品中的蛋白质组成和含量。
蛋白质电泳是一种常用的蛋白质分离和鉴定方法，可以应用于生物医学研究、食品科学、环境监测等领域。
匿名回答于2023-09-21 15:33:55
电泳是一种蛋白质和核酸分子的分离技术，它通过在凝胶中应用外加电场来将大分子物质沿其不同的尺寸或电荷性质拉开而分离，从而达到分离分析的目的。
电泳的原理是外加一个电场，使得悬浮于凝胶中的各种大分子物质受到电场的影响而沿着凝胶中不同尺寸或电荷性质的拉力而分离。由于大分子物质的电荷性质不同，因此会受到不同的拉力，从而产生不同的运动方向和速度，使得原本混在一起的各种大分子物质被拉开分离。
此外，电泳也可以用于精确测定大分子物质的量子量，即把不同浓度的样品进行电泳，然后观察其凝胶中的分布情况，最后计算出该样品的浓度。
基本方法：
(1)将蛋白质样品与5X样品缓冲液(20ul+5ul)在一个eppendorf 管中混合。放入100℃加热5-10min，离心取上清点样。
(2)将玻璃板、样品梳、Spacer用洗涤剂洗净，用ddH2O冲洗数次，再用乙醇擦拭，晾干。
(3)组装好玻璃板：固定玻璃板时，两边用力一定要均匀，防止夹坏玻璃板。
(4)按表格1，根据要检测的蛋白的分子大小，选择相应的分离胶浓度，按表格2的配方进行配制。配制过程要迅速，催化剂TEMED要在注胶前再加入，否则凝结无法注胶。注胶过程最好一次性完成,避免产生气泡。
(5)向玻璃板间灌制分离胶，立即覆一层重蒸水，大约20 min后胶即可聚合。水封的目的是为了使分离胶上延平直，并排除气泡。 凝胶聚合好的标志是胶与水层之间形成清晰的界面。
(6)按表格3配制浓缩胶。
(7)将分离胶上层重蒸水倾去，滤纸吸干，灌制浓缩胶，插入样品梳。注意，样梳需一次平稳插入,梳口处不得有气泡,梳底需水平。
(8)装好电泳系统，加入电极缓冲液，将样品梳拔去，上样。上样前请确保锯齿孔内的气泡全部排出,否则会影响加样效果。另外，上样过程中注射器不可过低，以防刺破胶体，也不可过高，在样下沉时会发生扩散。 为避免边缘效应，最好选用中部的孔注样。
(9)稳压200V，溴酚蓝刚跑出分离胶时，停止电泳，约需45 min～1hr. 最后，小心的将胶剥离玻璃板，进行下一步实验。
匿名回答于2023-09-21 15:34:09
